ПРАКТИКА 1 Фізіологія крові 1. Повторюємо матеріали лекції по плану: 1. Кров, як внутрішнє середовище організму, кількість крові у тварин 2. Склад крові 3. Фізико-хімічні властивості крові 2. В робочому зошиті виконуємо лабораторні роботи або проглядаємо відео до них: Робота 1. Отримання крові, плазми, сироватки і фібрину (сторінка 8) 1. На сторінці MOODL відео 3.1 Отримання крові (у собаки) 2. Получение сыворотки крови и форменных элементов 3. Правила получения плазмы 4. На сторінці MOODL відео 3.2. Определение гематокрита. 5. Spinning Microhematocrit 6. Measuring Microhematocrit *
Склад плазми Вода (90 - 92%) Сухий залишок органічних і неорганічних речовин (8 - 10%). До органічних речовин плазми крові відносяться білки (фібриноген, альбуміни, глобуліни), які складають 7 - 8% і інші низькомолекулярні речовини, - 2% (небілкові азотисті речовини, жири, мінеральні речовини, вітаміни). Питома вага плазми дорівнює 1,025 - 1,029 визначається концентрацією білків. В'язкість плазми - 1,7 - 2,2 усл.ед рН трохи коливається в межах від 7,37 до 7,43. *
HA=H+ + A- (диссоциация слабой кислоты) [H+] [A-] Кd= ----------- (константа диссоциации) [HA] [H+] [A-] [A-] logKd= log ---------- = log[H+] + log ------ [HA] [HA] [A-] -log [H+] = - log Kd + log ----- [HA] - log [H+] = рН рН - водневий показник - негативний логарифм концентрації водневих іонів - logKd= pKd - показник дисоціації Кислотно-основний стан крові *
рН - концентрація водневих іонів, яка виражається негативним десятковим логарифмом молярної концентрації іонів водню. У нормі рН - 7,36 (реакція слаболужна); артеріальна кров - 7,4; венозна - 7,35. Активна реакція крові є жорсткою константою, що забезпечує ферментативну діяльність. Крайні межі рН крові, сумісні з життям, дорівнюють 7,0 - 7,8. Зрушення реакції в кислу сторону називається ацидозом. Зрушення реакції крові в лужну сторону називається алкалозом. *
Гемоглобінова буферна система Буферні властивості обумовлені двома формами гемоглобіну : оксигемоглобіну HHbO2 і дезоксигемоглобину HHb. Механізм дії гемоглобінової буферної системи полягає в наступному. При пониженні рН ефективність зв'язування кисню гемоглобіном істотно знижується (ефект Бора) і оксигемоглобін перетворюється на дезоксигемоглобін: СО2 в еритроцитах ефективно перетворюється на Н2СО3 (вугільна кислота) під дією фермента карбоангідрази. При фізіологічній величині рН=7,4 Н2СО3, дисоціює практично на 90% і більше, що збільшує [H+]. *
* Робота 1. Отримання плазми, сироватки і фібрину Мета. Ознайомитись з методиками отримання плазми, сироватки крові і фібрину. Для роботи необхідні: піддослідні тварини, лимоннокислий натрій, спиртовий розчин йоду, спирт, штатив з пробірками, голки для отримання крові, дерев'яні палички, ножиці, вата. Хід роботи. Для отримання плазми з яремної вени тварин беруть 10 мл крові у стерильну пробірку, що містить 1 мл 5 %-го розчину лимоннокислого натрію. Вміст пробірки перемішують і центрифугують при 3000 об/хвилину протягом 20 хвилин. При цьому формені елементи (клітини) осядуть, а зверху залишиться жовтуватого кольору плазма. Для отримання сироватки пробірку з кров'ю поміщають до штативу і ставлять у термостат на 15—20 хвилин або тримають при кімнатній температурі. Через деякий час кров зсідається, наступає ретракція кров'яного згустку з виділенням сироватки солом'яно-жовтого кольору. Для отримання фібрину з кровоносної судини тварини у стаканчик беруть 10 мл крові, яку потім збовтують дерев'яною або пластмасовою паличкою. При цьому волокна фібрину намотуються на паличку. Відмиті у воді під краном нитки фібрину набувають жовтуватого кольору. Кров, що залишилася в стаканчику, називається дефібринованою.