Презентація "Ендонуклеази рестрикції ІІ типу"

Ендонуклеази рестрикції ІІ типу – ферменти генної інженеріїПідготувала. Галій Софія

Генна інженерія — це біотехнологічний прийом, спрямований на конструювання рекомбінантних молекул ДНК на основі ДНК, взятої з різних джерел, сукупність прийомів, методів і технологій одержання рекомбінантних РНК і ДНК, виділення генів з організму (клітин), здійснення маніпуляцій з генами і введення їх в інші організми.

Рестриктази або «ендонуклеази рестриції» розщеплюють ДНК в певних місцях (так званих сайтах рестрикції), вони підрозділяються на чотири типи (I, II, III та IV) на основі механізму дії. Ці білки часто використовують в генній інженерії для створення рекомбінантних ДНК, що потім вводять в бактеріальні, рослинні або тваринні клітини.

У технології рекомбінантних ДНК використовуються ендонуклеази ІІ типу.

Одна з перших ендонуклеаз рестрикції типа ІІ була виділена з бактерії Escherichia coliта отримала назву Eco. RI. Цей фермент впізнає ділянку ДНК, яка містить специфічну паліндромну послідовність (послідовність-перевертень, яка однаково читається у напрямку 5-3) з 6 пар основ та вносить розрив між залишками гуаніну та аденіну. При цьому розщеплюється зв'язок між атомом кисню при 3-атомі вуглецю цукрового залишку одного нуклеотиду та фосфатною групою, приєднаною до 5-вуглецевого атому цукрового залишку сусіднього нуклеотиду. Розриви у ланцюгу відбуваються таким чином, що утворюються так звані «липкі кінці».

Паліндромні послідовності, які розпізнаються ендонуклеазами рестрикції типу ІІ і в яких виникає розщеплення називаються «сайтами впізнання». Сайти впізнання можуть складатися з 4, 5, 6, 8 та більше пар нуклеотидів. Від довжини «сайту впізнання» залежить частота його розповсюдження у молекулі ДНК.

Кожна рестриктаза має свій сайт розпізнавання і може функціонувати тільки після зв'язування з ним.

Дякуюза увагу!