ТЕМА ЗАНЯТТЯ: ОТРИМАННЯ СПЕРМИ ВІД ПЛІДНИКІВ НА ШТУЧНУ ВАГІНУ. ПРОВЕДЕННЯ ОЦІНКИ ЯКОСТІ СПЕРМИ ВІД БУГАЇВ (КНУРІВ, БАРАНІВ)

ТЕМА ЗАНЯТТЯ: Отримання сперми від плідників на штучну вагіну. Проведення оцінки якості сперми від бугаїв (кнурів, баранів)

Робоче місце: манеж, ферма господарства ВП НУБіП України Немішаївського агротехнічного коледжу.

МЕТА РОБОТИ: 1. Ознайомитись з будовою і устаткуванням манежу для взяття сперми.

2. Засвоїти правила техніки безпеки при взятті сперми від бугаїв, баранів, кнурів і жеребців.

3. Набути первинних навичок з взяття сперми від плідників: визначити поведінку й сексуальні особливості кожного плідника при взятті сперми.

4. Виховувати дослідницькі якості та професійне мислення у студентів.

5. Навчитись проводити оцінку якості сперми від бугаїв-плідників.

6. Ознайомитись зі способами визначення концентрації сперміїв.

Матеріально-технічне оснащення робочого місця.

Рушники, мило, ртутно-кварцеві лампи, 0,02%-ний розчин фурациліну, розприскувач дезрозчинів, віник, гумовий шланг, вода, 0,025-ний розчин натрію марганцевокислого, щітка — душ, металеві скребуни, 2%-ний розчин натрію бікарбонату, одноразові серветки, фартух/для плідників/, розібрані штучні вагіни, стерильний вазелін, ебонітові палички, термошафа, термометр для вимірювання температури води, компресор для нагрівання повітря, одноразові спермоприймачі, стерилізатор, темний халат, клейон­частий фартух, одноразова поліетиленова п’ятипала рукавиця, фіксацій­ний станок для підставних бугаїв, підготовлені штучні вагіни, ножиці, плакати, Інструкції, книжки, тварини -бугаї. Мікроскопи, мензурки, мірні стакани, марлеві салфетки, електронагрівальні столики, ящик — термостат, скляні палички, предметні та накривні скельця, камери Горяєва, меланжери, 96-% спирт, 3-% розчин натрію хлориду, дистильована вода, спиртові тампони, фільтрувальний папір, свіжа сперма, фіолетове чорнило, 1% розчин металевого синього, ваги, чашки Петрі, рушники, мило.

 

ПРАВИЛА БЕЗПЕКИ ТА ОСОБИСТОЇ ГІГІЄНИ.

1. Обережно поводитись з плідником.

2. Сміливо і спокійно підходити до тварини.

3. Підводити тварину за допомогою мотузка чи палкиводило.

4. Обережно поводитись з електроприборами.

5. Акуратно виконувати завдання.

 

ЗМІСТ І ПОСЛІДОВНІСТЬ ВИКОНАННЯ ЗАВДАННЯ

Завдання № 1. Підготувати манеж і лабораторію до роботи

1. Провести механічне прибирання манежу та лабораторії.

2. 3а 30-40 хв. до роботи ввімкнути ртутно-кварцеві лампи.

3. 3а 10 хв. до роботи розбризкати в манежі 0,02%-ний розчин фурациліну при допомозі розприскувача дезрозчинів.

4. Після роботи в приміщеннях підмести, вимити підлогу, продезинфікувати 1,5%-ним розчином їдкого натру підлогу, станок для взяття сперми.

Завдання № 2. Підготувати плідника до взяття сперми

1. Плідника надійно фіксують. Працювати потрібно з дотриманням техніки безпеки.

2. Зробити механічну очистку плідника за допомогою металевих скребків, щіток.

3. Помити плідника теплою водою за допомогах) щітки-душа.

4. Шкірний покрив плідника обробити 0,02%-ним розчином калію перманганату.

5. Висушити плідника, витираючи його чистими серветками.

6. Провести туалет препуція плідника для цього зовнішню поверхню його обмити теплою водою з милом і насухо витерти одноразовою серветкою. Після цього препуцій плідника промивають 2%-ним розчином натрію бікарбонату або 0,02%-ним розчином фурациліну»

7. Надати пліднику активний моціон на протязі 5-10 хв.

8. 3а передніми кінцівками на грудну клітку підв’язати чистий фартух.

9. При відсутності в манежі чучел, у фіксаційний станок поставити підготовленого плідника.

Завдання № 3. Підготувати штучні вагіни до використання

1. Зібрати вагіну. Для цього камеру пропускають в середину циліндра, кінці II завертають І рівномірно натягують на краї циліндра. При цьому гладенька поверхня має бути обернена в просвіт вагін, на ній не повинно бути складок та перекручень.

2. Помити складену вагіну за допомогою йоржика теплим розчином натрі бікарбонату /2-3%/ або нагрію карбонату /1-1,5/.

3. Сполоснути штучну вагіну чистою гарячою водою І насухо витерти рушником.

4. Простерилізувати штучну вагіну кип’ятінням в стерилізаторі протягом 20 хв. /в дистильованій воді/.

5. Після охолодження влити в штучну вагіну через отвір, в циліндр 350-500 мл води температурою 55-65°.

6. Обробити внутрішню частину гумової камери за допомогою корцанга ватним тампоном, змоченим 96%-ним спиртом-ректифікатом.

7. Приєднати одноразовий спермоприймач.

8. Змастити внутрішню поверхню штучної вагіни за допомогою стериль­ної скляної чи ебонітової палички тонким шаром стерильного вазе­ліну. Кінець вагіни, на якому приєднаний спермоприймач, залишити незмащеним на 3-5 см.

9. Нагнітать повітря через краник так, щоб стінки камери зімкнулись.

10. Перед взяттям сперми виміряти температуру знезараженим термометром. Температура має бути в межах 40-41°С.

11. Покласти вагіну на підставку.

 

Завдання № 4. Підготовка техніка із взяття сперми.

1. Одягти темний халат і фартух.

2. На ліву руку одягти одноразову поліетиленову п’ятипалу рукавицю.

3. В праву руку взяти штучну вагіну.

3авдання № 5. Оволодіти технікою взяття сперми від бугая.

1. Ввести плідника в манеж при допомозі палки-водила до підставного бугая і витримати 3-5 хв.

2. Допустити садку на підставного бугая.

3. Після того як плідник стрибне на підставну тварину, правою рукою прикласти вагіну до таза підставної тварини під кутом 30-45° до поздовжньої осі тіла тварини, спермоприймачем догори відповідно до напрямку статевого члена, а лівою рукою відвести за припуцій стате­вого члена трохи вбік, спрямовуючи його кінець у штучну вапну.

4. Після характерного поштовху вперед, що свідчить про еякуляцію, штучну вагіну опускають спермоприймачем донизу, потім випускають через краник повітря, щоб сперма стікла в спермоприймач.

5. Зняти з штучної вагіни спермоприймач і прикріпити до нього етикетку, на якій вказати кличку бугая, дату І час взяття сперми, який за рахунком еякулят.

6. Одержаний еякулят передати в лабораторію для макро і мікроскопічного дослідження.

7. Використану штучну вагіну передати в мийну.

8. Через 5-10 хв. взяти другий еякулят від цього бугая.

Завдання № 6. Ознайомитись з технікою взяття сперми від плідників інших видів тварин

1. За допомогою книжок, плакатів, Інструкцій, конспекту ознайомитись з технікою взяття сперми від плідників баранів, кнурів, жеребців.

Завдання № 1. Оволодіти методикою макроскопічної оцінки якості сперми

1. Визначити об’єм сперми.

1.1 Об’єм сперми бугая визначають вимірюванням у градуйованих піпетках чи мензурках, або зважуванням (при чому 1г сперми дорівнює 1-му мл сперми.

1.2 Об’єм сперм у кнура і жеребця визначають у мірних стаканах після фільтрації через 2-3 шари стерильної марлі.

2. Визначити колір і консистенцію сперми.

3. Визначній запах сперми.

4. Результати записати в таблицю.

 

Завдання №2. Освоїти техніку мікроскопічної оцінки якості сперми на густоту і активність руху

1. Підготувати до роботи мікроскоп.

2. На мнете, знежирене, підігріте предметне скельце нанести стерильною скляною паличкою каплю нативної сперми і накрити її накривним скельцем, щоб під ним не було повітряних бульбашок.

3. Предметне скельце із спермою покласти під мікроскоп на електропідігрівальний столик з автоматичним регулюванням температури.

4. Під мікроскопом визначити густоту сперми і позначити великими літерами Г - густа, С - середня, Р -рідка, А - аспермія.

5. Під мікроскопом визначити активність руху сперміїв. Активність сперміїв визначають із бугая по 10 бальній шкалі. Визначити також спермії з коливальним рухом (К), манежним (М), некроспермію (Н).

6. Дані записати в таблицю наприклад: Г - 7 - сперма тобто, густа з активністю 7 балів.

 

Завдання №3. Освоїти методику визначення концентрації сперміїв За допомогою камери Горяєва

1. Для визначення концентрації сперми бугая застосовують еритроцитарний меланжер (змішувач, з червоною бусинкою) для сперми кнура і жеребця лейкоцитарний (з білою бусинкою).

2. Сперму бугая беруть у меланжер до позначки 1. Швидко обтирають кінчики змішувача ватою (стежать, щоб вата не увібрала в себе сперму із змішувача), а потім набирають 3% розчин натрію хлориду до позначки 101 таким чином сперму бугая розбавляють у 100 разів. Густу сперму бугая для прискорення роботи можна набрати до позначки 0,5 (розбавлення у 200 разів).

Перед використанням і після нього меланжери промити дистильованою водою і 96 спиртом ректифікатом, просушити продуванням гумовою грушею чи шарами Річардсона.

3. Затиснути кінці меланжера між великим і вказівним пальцями і струшують 1- 2хв, щоб рівномірно перемішати сперму з розчином.

4. Взяти знежирену камеру Горяєва і притерти покривне скельце до пластинки камери (до появи радужних кілець).

5. Із меланжера випустити 3-4 краплі змішаної сперми на ватку, а наступну каплю нанести під притерте до камери накривне скельце Залишки сперми біля накривного скельця вимокають ватою, щоб запобігти рухові рідини в камері.

Перед використанням і після нього камери Горяєва і накривні ске­льця протерти спиртовим тампоном, а потім сухою стерильною марлею.

6. Підготовлену камеру Горяєва покласти на предметний столик мікроскопа і підрахувати спермії при збільшені в 400 разів (при цьому в полі зору вміщається один великий квадрат, що складається в свою чергу із 16 маленьких квадратів). Спермії підраховують в 5 великих квадратах (у 80 маленьких) беручи великі квадрати по діагоналі. 1 Іри підрахунку не звертають увагу па розміщення хвостиків сперміїв, а лічать тільки їхні головки, що містяться в середині квадрата або лежать на лівій і верхній межі квадрата, спермії, які лежать па правій і нижній межі, зараховуються в сусідні квадрати.

7. Число підрахованих сперміїв у кожному великому квадраті записати на папері; підрахунок ведуть, з ліва на право вниз на ліво вниз на право.

8. Концентрацію сперміїв визначають за допомогою формули.

С = ПхД х 400 х 1000 / NхР

Де С — концентрація сперміїв в іммЗ

II — число підрахованих сперміїв.

Д — отупінь розрідження (100).

400 — множник для перерахунку в кв. мм

1000 — множник для перерахунку на мілілітри, оскільки в 1 мл міститься 1000 мм³

N — кількість малих квадратів (80),

Р — глибина камери Горяева (0,1 мм).

Тому для бугая:

С = П х 100 х 400 х 1000 / 80 х 0,1

Обчислюючи концентрацію сперміїв за спрощеним методом число Сперміїв у 5 великих квадратах слід ділити у барана на 100, у бугая На 200, у кнура, жеребця на 1000.

 

ТАБЛИЦЯ № 1. Ступінь розбавлення сперми для підрахунку сперміїв.

 

№ п/п	Сперма	Меланжер	Позначка до якої		Ступінь розбав. сперми.
			набирають cперму	3%NаСl
1	Барана	Еритроцитарний	0,5	101	200
2	Бугая	-	1,0	101	100
	Кнура	Лейкоцитарний	0,5	11	20
4	Жеребця	-	0,5	11	20

 

Завдання №4. Освоїти методику підрахунку патологічних форм сперміїв

1. Сперму бугая, барана розбавити в стерильній колбочці, 1% розчин натрію хлориду в співвідношенні 1:20 — 30.

2. На кінець знежиреного предметного скельця нанести невелику краплю розбавленої сперми і ребром накривного скельця легенько зробити тонким мазком, щоб не травмувати і не розбавити сперміїв.

3. Мазок просушити протягом 1 — 2 хв. Зафіксувати мазок в 96 спирті протягом 2-5 хв. і сполоснути дистильованою водою.

4. Зафарбувати 3 — 5хв фіолетовим чорнилом чи яким — небуть мікробіологічним барвником (фуксином, метиленовим синім). Фарбу промити дистильованою водою і просушити на повітрі.

5. Пофарбований мазок розглянути під мікроскопом при збільшені в 400-600 разів і підрахувати в декількох полях зору не 500 сперміїв. Наприклад: було підраховано 502 спермії, в тому числі 60 з патологічними формами то % патологічних сперміїв буде.

502 - 100

60 - х х=60х 100/502= 11%

 

Завдання № 5. Результати оцінки якості сперми занести в таблицю

Вид плідника	Об’єм сперми	Запах	колір	Консисте­нція	Гус­тота	Активність	Концентрацію	Пат. спермії

 

Після виконання завдання студент повинен ЗНАТИ:

1. Теорію по темі Одержання сперми від плідників.

2. Будову штучної вагіни.

3. Статеві рефлекси самців.

4. Умови, які створюються в штучній вагіні під час взяття сперми.

5. Теорію по темі “Оцінка якості сперми”.

 

 

УМІТИ: 1. Приготувати плідника до взяття сперми.

2. Підготовлювати манеж та лабораторію до взяття сперми.

3. Підготовлювати штучні вагіни до використання.

4. Уміти брати сперму від бугая.

5. Оцінювати сперму по органолептичним показникам.

6 Уміти визначати активність, густину концентрацію сперми, визначати сперму па наявність пат. форм.

 

Зміст звіту:

Після виконання завдань студенти письмово звітують про хід виконання роботи та результати завдань.

Домашнє завдання:

1. Журавель М.П., Давиденко В.М. Технологія відтворення с/г тварин – К.:  Слово, 2005. 336с.

2. Карташов І.І. Шарапа Г.С. Акушерство, гінекологія і штучне осіменіння сільськогосподарських тварин  тварин: Навч. посібник. – К.:  Вища школа, 1991.

3. Яблонський В.А. Практичне акушерство, гінекологія та біотехнологія відтворення тварин з основами андрології. – К.: Мета, 2002.

4. Інструкція зі штучного осіменіння корів і телиць Київ, міністерство аграрної політики України Національне об’єднання по племінній справі у тваринництві “Укрплемоб’єднання” Затверджено наказом Міністерства аграрної політики Укаїни 1 серпня 2001 р. № 230.

ВИКЛАДАЧІ:                                                                                   Овчарук В.М.

                                                                                                 Овчарук Н. П.