Методичні матеріалм на тему: "Оцінка якості сперми сільськогосподарських тварин"

Методичні матеріали на тему:

«Проведення оцінки якості сперми

 сільськогосподарських тварин»

Робоче місце: манеж, клініка ВП НУБіП України Немішаївського агротехнічного коледжу.

МЕТА РОБОТИ:

1. Засвоїти правила техніки безпеки  та особистої гігієни при роботі зі спермою, електроприладами.

2. Виховувати дослідницькі якості та професійне мислення у студентів.

3. Навчитись проводити оцінку якості сперми сільськогосподарських тварин

4. Ознайомитись зі способами визначення концентрації сперміїв.

Матеріально-технічне оснащення робочого місця.

Стенди, плакати, інструкції, мікроскопи, мензурки, мірні стакани, марлеві салфетки, електронагрівальні столики, ящик — термостат, скляні палички, предметні та накривні скельця, камери Горяєва, меланжери, 96-% спирт, 3-% розчин натрію хлориду, дистильована вода, спиртові тампони, фільтрувальний папір, свіжа сперма, фіолетове чорнило, 1% розчин металевого синього, ваги, чашки Петрі, рушники, мило.

ПРАВИЛА БЕЗПЕКИ ТА ОСОБИСТОЇ ГІГІЄНИ.

1. Обережно поводитись з електроприборами.

2. Акуратно виконувати завдання.

3. Дотримуватися правил особистої гігієни.

ЗМІСТ І ПОСЛІДОВНІСТЬ ВИКОНАННЯ ЗАВДАННЯ

Завдання № 1. Оволодіти методикою макроскопічної оцінки якості сперми

1. Визначити об’єм сперми.

1.1 Об’єм сперми бугая визначають вимірюванням у градуйованих піпетках чи мензурках, або зважуванням (при чому 1г сперми дорівнює 1-му мл сперми.

1.2 Об’єм сперм у кнура і жеребця визначають у мірних стаканах після фільтрації через 2-3 шари стерильної марлі.

2. Визначити колір і консистенцію сперми.

3. Визначній запах сперми.

4. Результати записати в таблицю.

Завдання №2. Освоїти техніку мікроскопічної оцінки якості сперми на густоту і активність руху

1. Підготувати до роботи мікроскоп.

2. На мнете, знежирене, підігріте предметне скельце нанести стерильною скляною паличкою каплю нативної сперми і накрити її накривним скельцем, щоб під ним не було повітряних бульбашок.

3. Предметне скельце із спермою покласти під мікроскоп на електропідігрівальний столик з автоматичним регулюванням температури.

4. Під мікроскопом визначити густоту сперми і позначити великими літерами Г - густа, С - середня, Р -рідка, А - аспермія.

5. Під мікроскопом визначити активність руху сперміїв. Активність сперміїв визначають із бугая по 10 бальній шкалі. Визначити також спермії з коливальним рухом (К), манежним (М), некроспермію (Н).

6. Дані записати в таблицю наприклад: Г - 7 - сперма тобто, густа з активністю 7 балів.

Завдання №3. Освоїти методику визначення концентрації сперміїв За допомогою камери Горяєва

1. Для визначення концентрації сперми бугая застосовують еритроцитарний меланжер (змішувач, з червоною бусинкою) для сперми кнура і жеребця лейкоцитарний (з білою бусинкою).

2. Сперму бугая беруть у меланжер до позначки 1. Швидко обтирають кінчики змішувача ватою (стежать, щоб вата не увібрала в себе сперму із змішувача), а потім набирають 3% розчин натрію хлориду до позначки 101 таким чином сперму бугая розбавляють у 100 разів. Густу сперму бугая для прискорення роботи можна набрати до позначки 0,5 (розбавлення у 200 разів).

Перед використанням і після нього меланжери промити дистильованою водою і 96 спиртом ректифікатом, просушити продуванням гумовою грушею чи шарами Річардсона.

3. Затиснути кінці меланжера між великим і вказівним пальцями і струшують 1- 2хв, щоб рівномірно перемішати сперму з розчином.

4. Взяти знежирену камеру Горяєва і притерти покривне скельце до пластинки камери (до появи радужних кілець).

5. Із меланжера випустити 3-4 краплі змішаної сперми на ватку, а наступну каплю нанести під притерте до камери накривне скельце Залишки сперми біля накривного скельця вимокають ватою, щоб запобігти рухові рідини в камері.

Перед використанням і після нього камери Горяєва і накривні ске­льця протерти спиртовим тампоном, а потім сухою стерильною марлею.

6. Підготовлену камеру Горяєва покласти на предметний столик мікроскопа і підрахувати спермії при збільшені в 400 разів (при цьому в полі зору вміщається один великий квадрат, що складається в свою чергу із 16 маленьких квадратів). Спермії підраховують в 5 великих квадратах (у 80 маленьких) беручи великі квадрати по діагоналі. 1 Іри підрахунку не звертають увагу па розміщення хвостиків сперміїв, а лічать тільки їхні головки, що містяться в середині квадрата або лежать на лівій і верхній межі квадрата, спермії, які лежать па правій і нижній межі, зараховуються в сусідні квадрати.

7. Число підрахованих сперміїв у кожному великому квадраті записати на папері; підрахунок ведуть, з ліва на право вниз на ліво вниз на право.

8. Концентрацію сперміїв визначають за допомогою формули.

С = ПхД х 400 х 1000 / NхР

Де С — концентрація сперміїв в іммЗ

II — число підрахованих сперміїв.

Д — отупінь розрідження (100).

400 — множник для перерахунку в кв. мм

1000 — множник для перерахунку на мілілітри, оскільки в 1 мл міститься 1000 мм³

N — кількість малих квадратів (80),

Р — глибина камери Горяева (0,1 мм).

Тому для бугая:

С = П х 100 х 400 х 1000 / 80 х 0,1

Обчислюючи концентрацію сперміїв за спрощеним методом число Сперміїв у 5 великих квадратах слід ділити у барана на 100, у бугая На 200, у кнура, жеребця на 1000.

ТАБЛИЦЯ № 1. Ступінь розбавлення сперми для підрахунку сперміїв.

Завдання №4. Освоїти методику підрахунку патологічних форм сперміїв

1. Сперму бугая, барана розбавити в стерильній колбочці, 1% розчин натрію хлориду в співвідношенні 1:20 — 30.

2. На кінець знежиреного предметного скельця нанести невелику краплю розбавленої сперми і ребром накривного скельця легенько зробити тонким мазком, щоб не травмувати і не розбавити сперміїв.

3. Мазок просушити протягом 1 — 2 хв. Зафіксувати мазок в 96 спирті протягом 2-5 хв. і сполоснути дистильованою водою.

4. Зафарбувати 3 — 5хв фіолетовим чорнилом чи яким — небуть мікробіологічним барвником (фуксином, метиленовим синім). Фарбу промити дистильованою водою і просушити на повітрі.

5. Пофарбований мазок розглянути під мікроскопом при збільшені в 400-600 разів і підрахувати в декількох полях зору не 500 сперміїв. Наприклад: було підраховано 502 спермії, в тому числі 60 з патологічними формами то % патологічних сперміїв буде.

502 - 100

60 – х              х=60х 100/502= 11%

Завдання № 5. Результати оцінки якості сперми занести в таблицю

Після виконання завдання студент повинен ЗНАТИ:

1. Теорію по темі “Оцінка якості сперми”.

УМІТИ:

1. Оцінювати сперму по органолептичним показникам.

2. Уміти визначати активність, густину концентрацію сперми, визначати сперму па наявність пат. форм.

Зміст звіту:

Після виконання завдань студенти письмово звітують про хід виконання роботи та результати завдань.

Домашнє завдання:

1. Журавель М.П., Давиденко В.М. Технологія відтворення с/г тварин – К.:  Слово, 2005. 336с.

2. Карташов І.І. Шарапа Г.С. Акушерство, гінекологія і штучне осіменіння сільськогосподарських тварин  тварин: Навч. посібник. – К.:  Вища школа, 1991.

3. Яблонський В.А. Практичне акушерство, гінекологія та біотехнологія відтворення тварин з основами андрології. – К.: Мета, 2002.

4. Інструкція зі штучного осіменіння корів і телиць Київ, міністерство аграрної політики України Національне об’єднання по племінній справі у тваринництві “Укрплемоб’єднання” Затверджено наказом Міністерства аграрної політики Укаїни 1 серпня 2001 р. № 230.

ВИКЛАДАЧ:                                                                                  

                                                                                                 Овчарук Н. П.