Лабораторна робота №1. Якісне визначення ферментів у біологічних об’єктах

Лабораторна робота №1.

Якісне визначення ферментів у біологічних об’єктах

Мета: сформувати навички й вміння якісного визначення ферментів у природних джерелах.

Дослід №1. Виявлення каталази в розчинах

Реактиви: 3% розчин H₂O₂.

Матеріали дослідження: екстракти свіжих овочів

Принцип: каталаза прискорює реакцію розщеплення перекису водню:

2H₂O₂ → 2Н₂О + О₂

У цій реакції одна молекула перекису водню окислюється і є донором електронів, а інша відновлюється і є акцептором електронів. Фермент виявляється за появою пухирців кисню.

Проведення аналізу

У дві пробірки вносять по 10 крапель перекису водню. В одну з них додають 1 краплину екстракту свіжих овочів (напр. картоплі), в іншу не додають. Порівнюють результати і пояснюють їх.

Дослід № 2. Виявлення холінестерази

 Реактиви: 1) індикатор бромтимоловий синій, 2) насичені розчини ацетилхолінхлориду, ацетилсаліцилової кислоти та бутилацетату.

Матеріали дослідження: екстракт печінки курки домашньої.

Принцип: холінестераза прискорює реакцію розщеплення складноефірних сполук. У процесі гідролізу виділяється кислота, тому для виявлення холінестерази використовують кислотно-основні індикатори, зокрема бромтимоловий синій. Цей індикатор дає чіткий інтервал переходу забарвлення від синього (рН = 0,7) до жовтого (рН = 7,2).

Проведення аналізу

У три пробірки наливають по 0,5 мл екстракту печінки курки домашньої і по 1 мл води. Пробірки поставити на водяну баню при 30°С на 7-10 хв, потім додати по 0,5 мл розчинів субстрату і по 2 краплі індикатора бромтимолового синього. Спостерігаємо зміну забарвлення.

Оформлення роботи

Зазначають принципи методу, результати заносять до таблиці 1.

Таблиця 1.Результати виявлення холінестерази