Висолювання білків сульфатом амонію. Лабораторна робота

Висолювання білків сульфатом амонію. Лабораторна робота

Обладнання та реактиви. Обладнання та реактиви: Штатив з пробірками; розчин яечного білка: насичений розчин сульфату амонію; 10%-ий розчин гідроксиду натрію; 1%-ий розчин сульфату міді; етанол, ацетон, хлороформ; 1%-ий розчин оцтової кислоти і гідроксиду натрію; концентровані cipчана, соляна, азотна кислоти; 20%-ий розчин сульфосаліцилової кислоти; 5%-ий розчин трихлороцтової кислоти; 5%-ий розчин сульфату міді i ацетату свинцю.

Хід роботи Висолювання це осадження білків високими концентраціями нейтральних солей лужнихілужноземельних металів. в пробірку наливають 1 мл розчину білка, добавляють такий же об'єм насиченого розчину сульфату амонію і збовтують. Випадає осад глобулінів. Через 5 хв. осад відфільтровують, у фільтраті залишаються альбуміни. Для осадження альбумінів до фільтрату додають кристалічний сульфат амонію до повного насичення, тобто, поки кристали ( NH4)2 SO4 не перестануть розчинятись. В осад випадають альбуміни, які відфільтровують. Перевіряють фільтрат на присутність білка біуретовою pеакцією.

Приклад реакції

Загальний висновок. Висолювання - процес осадження білків солями лужних і лужно-земельних металів, який є оборотним і зберігає нативні властивості білків. Висолювання можна проводити не тільки солями активних металів (Na2 SO4, Na. Cl, KCl, Mg. SO4, Mg. Cl2 і ін.), але і солями амонію, наприклад (NH4)2 SO4. Всі речовини цього типу нейтралізують заряд білкових частинок і викликають їх дегідратацію, що веде до осадження білка. Механізм цього процесу може бути представлений таким чином. Іони солі притягають поляризовані молекули води, зменшуючи тим самим кількість води, яка взаємодіє з білком, оскільки при високих концентраціях солей кількість іонів солі величезне порівняно з числом заряджених груп білків. Переміщення молекул води до іонів солі супроводжується одночасним руйнуванням захисних гідратних оболонок навколо молекул білків і веде до зниження їх розчинності. Білки осідають також з водних розчинів неполярними розчинниками, що змішуються з водою.